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發(fā)布時間：2020-10-15 11:46?? 咨詢量：
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產(chǎn)品詳情
| 名稱： | MTT-Cell Based Proliferation/Toxicity Assay Kit | |||||||||
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| 介紹： | MTT細胞增殖及細胞毒性檢測試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應(yīng)用于細胞增殖和細胞毒性的檢測。MTT分析為對活細胞內(nèi)琥珀酸脫氫酶活性的比色測定，活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結(jié)晶甲臜（formazan）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。主要用于分析細胞生存能力及細胞增殖能力，也可用于藥物的潛在毒性實驗，因為藥物可刺激或抑制細胞的生存及生長。甲臜溶解液可溶解細胞中的甲瓚并產(chǎn)生有色溶液。用酶聯(lián)免疫檢測儀在570nm波長處測定其光吸收值，可間接反映活細胞數(shù)量。在一定細胞數(shù)范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶形成的量與細胞數(shù)成正比。 | |||||||||
| 貨號： | K017 | |||||||||
| 套件組分： |
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| 故障排除指南： |
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| 所需但未提供的材料： | √ 移液器和槍頭
√ 用于培養(yǎng)細胞的96孔板 √ 能夠測量570 nm處的吸光度96孔酶標儀 √ 蒸餾水 | |||||||||
| 執(zhí)行測定： | 步驟7中獲得的數(shù)據(jù)（吸光度與細胞數(shù)的關(guān)系）圖應(yīng)提供具有線性部分的曲線。用于檢測的細胞數(shù)量應(yīng)在曲線的線性最??佳部分內(nèi)，并且吸光度值介于0.75和1.25之間，然后可以測量刺激和抑制細胞增殖。為獲得最佳結(jié)果，應(yīng)使用處于對數(shù)生長期的細胞，并且最終細胞數(shù)應(yīng)不超過106個細胞/cm2。每個實驗應(yīng)在無細胞的孔中做空白對照，其中添加所有試劑。分析將包括：
1.空白孔僅包含培養(yǎng)基。 2.未經(jīng)處理的對照細胞。 3.用待測物質(zhì)處理過的測試細胞。 如果每孔使用的培養(yǎng)基超過100ul ，則相應(yīng)增加MTT試劑的量；例如，對于250ul 培養(yǎng)基，請使用25ul MTT試劑。 | |||||||||
| 數(shù)據(jù)解釋： | 低于對照細胞的吸光度值表明細胞增殖速率降低。相反，較高的吸收率表明細胞增殖增加。很少有增殖的細胞數(shù)量可以被細胞死亡所抵消。細胞死亡的證據(jù)可以從形態(tài)變化中推斷出來。 | |||||||||
| 操作步驟：96孔板操作： | 如果您熟悉此過程并且知道要在特定測定中使用的細胞計數(shù)，則可以遵循此基本規(guī)程。
1.96孔板中的初始細胞在100ul 培養(yǎng)基中的密度為2000細胞/孔（用于增殖測定）或5000細胞/孔（毒性測定）（取決于細胞類型） 2.根據(jù)實驗孵育適當?shù)臅r間，并用待測物質(zhì)進行處理。 3.加入10ul MTT試劑 4.在培養(yǎng)箱中孵育細胞3-4小時。黑褐色的formazan晶體在細胞中形成。如果細胞密度更高，可以相應(yīng)地縮短孵育時間。 5.加入100ul formazan溶解溶液。 6.當紫色沉淀完全溶解時，在37°C孵育4小時。 7.記錄在570 nm的吸光度。 注意： 1.由于使用96孔板進行檢測，如果細胞培養(yǎng)時間較長，一定要注意蒸發(fā)的問題。一方面，由于96孔板周圍一圈最容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS，水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以緩解蒸發(fā)。 2.Formazan溶解液結(jié)凍或產(chǎn)生沉淀時可以56℃水浴孵育促進溶解，并且必須在全部溶解并混勻后使用。 3.MTT配制成溶液后為黃色，需避光保存，長時間光照會導致失效。當顏色變?yōu)榛揖G色時請勿使用。 |
