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提高單抗融合率的6大影響因素
來源：菲恩生物 發(fā)布時間：2020-07-17 13:43 點擊量：
剛開始做單抗的時候難免會碰到細胞融合不成功或者是融合率比較低的情況，現(xiàn)在小編就總結(jié)幾點影響融合率的因素，希望能夠?qū)ψ鰧嶒灥目蒲泄ぷ髡哂悬c幫助。
1.融合之前一定要取小鼠血檢測效價，效價高于2萬才比較適合做融合，低于2W效價的融合效果可能會不太理想。
2.骨髓瘤細胞SP2/0的狀態(tài)很重要，一定要保證細胞狀態(tài)非常好、無污染、大面積死亡現(xiàn)象，融合前一定要保持細胞對數(shù)生長期。
3.融合使用的PEG、胎牛血清質(zhì)量直接決定了融合率高低，對不同品牌、批號的產(chǎn)品進行預實驗篩選，選擇質(zhì)量最好的PEG、胎牛血清能有效保證融合成功率。
4.融合時SP2/0與脾細胞的比例也需要注意，雖然10:1-1:10都能融合成功，但最佳的融合效率一般在2:1-1:2之間。無論何種比例，融合時一定要保證2種細胞都不含血清成分并充分混勻在一起，融合過程中要始終保持融合管旋轉(zhuǎn)，滴加PEG及終止融合時都應遵循先慢后快的原則，避免對細胞沖擊過大。
5.飼養(yǎng)層細胞這個因素也會影響融合效果，小鼠腹腔巨噬細胞、脾細胞、胸腺細胞等都可以作為雜交瘤的飼養(yǎng)細胞，其中以腹腔巨噬細胞為最佳。同時，每孔的飼養(yǎng)細胞數(shù)量也需要注意，過多會爭奪培養(yǎng)基營養(yǎng)使雜交瘤細胞生長難以維繼，過少會起不到飼養(yǎng)層的作用，所以需要保持在一個合理范圍內(nèi)才能起到良好的效果。
6.合理的使用一些添加劑產(chǎn)生事半功倍的效果，例如本公司自行研制的雜交瘤細胞培養(yǎng)基添加劑，可以有效延長培養(yǎng)基使用壽命、提高雜交瘤細胞生長速度、提高融合率，在實驗條件不太理想時也能保持較高的融合效率。
當然影響融合率的還有一些其他因素，比如融后每孔細胞鋪的數(shù)量多少、離心轉(zhuǎn)速及時間、吹打細胞力度等都會產(chǎn)生一定影響，實際實驗過程中就得靠我們多加注意積累經(jīng)驗，自然熟能生巧，水到渠成了。
