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尊敬的用戶(hù)：

您好！衷心感謝您選擇了本公司的ELISA試劑盒！因不同公司的試劑盒、不同方法的試劑盒操作細(xì)節(jié)不盡相同，為了幫您更加高效地完成實(shí)驗(yàn)，節(jié)約您的珍貴樣品及寶貴時(shí)間，請(qǐng)?jiān)趯?shí)驗(yàn)開(kāi)始前認(rèn)真閱讀以下幾條提示。

一、認(rèn)真閱讀隨貨說(shuō)明書(shū)，了解試劑盒操作步驟。試劑盒的出廠檢測(cè)步驟及數(shù)據(jù)均以隨貨說(shuō)明書(shū)為依據(jù)。

二、樣品的準(zhǔn)備：樣品準(zhǔn)備相關(guān)材料，請(qǐng)查看以下連接或二維碼：https://www.fn-test.cn/downloads/
 

三、了解檢測(cè)樣品的大致含量，預(yù)估各組別所需稀釋比。因本公司可得樣品種類(lèi)及數(shù)量有限，隨貨說(shuō)明書(shū)建議的稀釋比為有限樣品的測(cè)試結(jié)果，以正常血清、正常血漿、細(xì)胞裂解液或細(xì)胞培養(yǎng)上清為主，不代表此指標(biāo)所有樣品表達(dá)情況。因疾病或模型處理等因素，您的各實(shí)驗(yàn)組樣品最佳稀釋比與說(shuō)明書(shū)推薦稀釋比，可能并不相符，甚至相差十倍、百倍、甚至千萬(wàn)倍。為避免試劑盒及樣品的浪費(fèi)，建議您查閱相關(guān)文獻(xiàn)，了解目的物在相應(yīng)疾病或模型處理下的變化趨勢(shì)。然后再通過(guò)一次預(yù)實(shí)驗(yàn)，獲得對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組的最佳稀釋比。

四、預(yù)實(shí)驗(yàn)的必要性

預(yù)實(shí)驗(yàn)看起來(lái)是浪費(fèi)時(shí)間、浪費(fèi)樣品、浪費(fèi)試劑，但了解預(yù)實(shí)驗(yàn)的目的和效果會(huì)發(fā)現(xiàn)，其實(shí)是最大的節(jié)約。首先，對(duì)這個(gè)陌生的試劑盒有了初步的了解，也是一次檢驗(yàn)，避免因?yàn)椴僮鞑襟E或者試劑盒本身質(zhì)量問(wèn)題浪費(fèi)您大批量的珍貴樣品。其次，通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)組別間少量樣品的檢測(cè)，可以推斷出各組樣品的最佳稀釋比。

五、預(yù)實(shí)驗(yàn)的樣品稀釋方案

1、首先，板孔數(shù)目計(jì)算。預(yù)包被酶標(biāo)板為12條*8孔可拆卸板條。預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)，需同時(shí)測(cè)試一條標(biāo)準(zhǔn)曲線及不同組別的少量樣品。若板孔預(yù)算實(shí)在緊張，至少也需測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)品最高孔、中濃度、低濃度、零孔。不同組別間的樣品，分別選1-2個(gè)，進(jìn)行不同稀釋比測(cè)試，假如每個(gè)樣品做四個(gè)不同稀釋比。所需板孔數(shù)目為標(biāo)準(zhǔn)品孔+樣品數(shù)*4。

2、預(yù)實(shí)驗(yàn)樣品如何稀釋更好？是1/2,1/4,1/8,1/16這樣梯度嗎？稀釋到什么時(shí)候合適呢？

這里，建議您間隔10倍進(jìn)行，參考推薦稀釋比范圍設(shè)置3-4個(gè)10倍稀釋條件。下面我們以h.CRP（C-reactive protein，C-反應(yīng)蛋白）舉例：假如您有4個(gè)組別的血清樣品，說(shuō)明書(shū)推薦的正常血清稀釋比是1/5000-1/10000，您通過(guò)查閱文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)，C-反應(yīng)蛋白是在機(jī)體受到感染或組織損傷時(shí)血漿中一些急劇上升的蛋白質(zhì)。所以您的樣品組，稀釋比至少需要1/10000。這時(shí)，我們來(lái)間隔10倍設(shè)計(jì)稀釋比，也就是1/10,000、1/100,000、1/1000,000、1/10,000,000。若其它指標(biāo)盒子正常血清是1/2的指標(biāo)，得病上升，則建議1/2、1/10、1/100、1/1000。

3、為什么要間隔10倍稀釋呢？

標(biāo)準(zhǔn)曲線一般是梯度稀釋的7個(gè)點(diǎn)+零孔，像一把跨度64倍的計(jì)量尺。樣品的上升或下降幅度未知，稀釋跨度過(guò)小，會(huì)浪費(fèi)過(guò)多的板孔或者實(shí)驗(yàn)結(jié)束發(fā)現(xiàn)仍舊超出標(biāo)準(zhǔn)曲線最高孔。稀釋跨度過(guò)大，有可能找不到最佳稀釋比。而 10倍間隔稀釋?zhuān)倳?huì)有一個(gè)稀釋比剛好落在64倍計(jì)量尺之間。

六、預(yù)實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)

① 檢查試劑盒的組件。核查說(shuō)明書(shū)清單中的組件是否齊全，有無(wú)缺少或者漏液的情況。若有異常，請(qǐng)第一時(shí)間聯(lián)系我們給您處理。

② 微量試劑會(huì)因運(yùn)輸沾滿(mǎn)試劑管蓋，為避免損失影響實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)離心后再開(kāi)蓋。

③ 盡量不在同一時(shí)間打開(kāi)多種不同的試劑盒，以防搞混試劑盒組件。若無(wú)法避免，可使用記號(hào)筆在組件蓋子上做好標(biāo)記，防止操作中混淆組件導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)失敗。

④ 試劑盒未開(kāi)封時(shí)，置于2-8℃保存。開(kāi)啟后，酶標(biāo)板和凍干的標(biāo)準(zhǔn)品，可在-20℃保存來(lái)延長(zhǎng)使用壽命。干燥的環(huán)境更利于它們的保存，一旦受潮，酶標(biāo)板和標(biāo)準(zhǔn)品會(huì)喪失部分活性。其他液體試劑，置于2-8℃保存，嚴(yán)禁凍存，凍存會(huì)使性能?chē)?yán)重下降。

⑤ 試劑盒所提供的凍干標(biāo)準(zhǔn)品在溶解后的最高濃度，保存于2-8℃，可在12小時(shí)內(nèi)使用，請(qǐng)勿凍存。合理安排時(shí)間時(shí)，您可以在12小時(shí)內(nèi)完成兩輪測(cè)試。含有2支標(biāo)準(zhǔn)品的情況下，可以進(jìn)行至少4次實(shí)驗(yàn)。

七、樣品稀釋小技巧

如果您檢測(cè)的物質(zhì)需要稀釋比例較大，比如稀釋10萬(wàn)倍，同時(shí)樣品數(shù)目過(guò)多，那么樣品稀釋的工作將是一項(xiàng)挑戰(zhàn)。這里我們提供一些技巧幫助您提高效率和精度。

① 準(zhǔn)備工作：

96孔 2ml深孔板（可以滅菌，反復(fù)使用）

96孔細(xì)胞培養(yǎng)板或者酶標(biāo)板（一次性使用）

加樣槽（一次性使用或者可滅菌）

10-100ul 8道或12道移液器

20-200ul或30-300 ul 8道或12道移液器

② 操作步驟：

選擇深孔板

第一步：稀釋500倍。按照深孔板的順序排列好待測(cè)樣品。使用單道移液器吸取3ul樣品加入空白深孔板的孔底，每孔加入1.497ml生理鹽水，用搖床緩慢震蕩3分鐘來(lái)混勻樣品，此時(shí)樣品為1/500稀釋?zhuān)瑯?biāo)記 S-5百倍

第二步：再稀釋100倍。繼續(xù)按第一步的方法，使用排槍吸取10ul第一步稀釋后的樣品，加入到另外一塊新的深孔板后，再向孔內(nèi)加入990ul生理鹽水，震蕩3分鐘混勻，此時(shí)樣品共稀釋了5萬(wàn)倍，標(biāo)記S-5萬(wàn)倍。 

第三步：最后用樣品稀釋液稀釋一倍。使用50ul多道移液器向ELISA預(yù)包被酶標(biāo)板樣品孔中加入50ul試劑盒自帶的樣品稀釋液，然后吸取50ul稀釋了5萬(wàn)倍的（S-5萬(wàn)倍）樣品加入ELISA樣品孔，震蕩3分鐘混勻樣品，此時(shí)樣品完成十萬(wàn)倍稀釋。將酶標(biāo)板覆膜，置于37℃溫箱靜置孵育。

③ 注意事項(xiàng)

一百萬(wàn)倍稀釋或其他稀釋情況，請(qǐng)參考步驟二完成。

如果您使用96孔酶標(biāo)板或細(xì)胞培養(yǎng)板來(lái)進(jìn)行多樣品大比例稀釋?zhuān)虬蹇椎淖畲笕萘繛?50ul/孔，可以先使用生理鹽水100倍稀釋?zhuān)▽?ul樣品稀釋到300ul），模仿以上方法進(jìn)行稀釋。加樣前，需使用試劑盒樣品稀釋液再進(jìn)行1/2稀釋來(lái)完成樣品稀釋工作（因樣品稀釋液在加樣量的最小占比是50%時(shí)，才能有效穩(wěn)定PH值，才能保證樣品檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。）