IP實(shí)驗(yàn)原理
IP又稱(chēng)免疫沉淀（Immunoprecipitation），是利用抗原和抗體的特異性結(jié)合以及“proteinA/G”特異性結(jié)合到抗體的FC片段的現(xiàn)象開(kāi)發(fā)出來(lái)的方法，簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，抗原與抗體類(lèi)似于鎖和鑰匙之間的關(guān)系，一把鑰匙（抗體）只能開(kāi)一把鎖（抗原），而鑰匙可以通過(guò)鑰匙鏈（細(xì)菌蛋白的“proteinA/G”）快速找到。ProteinA/G抗體-目的蛋白復(fù)合物從混合液中沉淀下來(lái)，最后將靶蛋白從磁珠上洗脫，并通過(guò)SDS-PAGE，Western Blot等手段對(duì)洗脫下來(lái)的蛋白進(jìn)行分析。
IP是用來(lái)富集目的蛋白的，那么在生物體內(nèi)蛋白一般可能會(huì)與什么結(jié)合呢？
這個(gè)我想大家都知道，那就是DNA、RNA、蛋白質(zhì)。通過(guò)IP的方法富集蛋白，檢測(cè)與其結(jié)合的DNA的方法即為ChIP；通過(guò)IP的方法富集蛋白，檢測(cè)與其結(jié)合的RNA的方法即為RIP；通過(guò)IP的方法富集蛋白，檢測(cè)與其結(jié)合的蛋白的方法即為coIP。
CoIP又叫免疫共沉淀，利用抗原A與蛋白質(zhì)B結(jié)合，通過(guò)A的抗體（鑰匙）沉淀A（鎖），再利用精制的proteinA（鑰匙鏈）預(yù)先結(jié)合到磁珠上，使之與含有抗原的溶液及抗體反應(yīng)后，磁珠上的proteinA就能吸附抗體，從而獲得抗原A與抗原B的結(jié)合體，之后就可以對(duì)B檢測(cè)，獲得蛋白質(zhì)之間的相互作用信息。
RIP又叫RNA免疫沉淀，利用抗原A與RNA B結(jié)合，抗原A的抗體把相應(yīng)的RNA-蛋白復(fù)合物沉淀下來(lái)，經(jīng)過(guò)分離純化對(duì)RNA進(jìn)行測(cè)序或PCR分析，就可以獲得RNA與蛋白相互作用的信息。
CHIP又叫染色質(zhì)免疫共沉淀，利用抗原A與DNA B結(jié)合，抗原A的抗體把相應(yīng)的DNA-蛋白復(fù)合物沉淀下來(lái)，經(jīng)過(guò)分離純化對(duì)目的DNA片段分析，就可以獲得蛋白質(zhì)與DNA相互作用的信息。
